慢病毒转染增强剂说明书

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慢病毒转染增强剂说明书

产品描述：

Polybrene（聚凝胺）是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物

细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene目前广泛

用于逆转录病毒介导的基因转染，慢病毒介导的基因转染，作用机理

可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促

进吸附作用。Polybrene也是一种有名的抗肝素剂（肝素拮抗剂），常

用来生产非特异性凝集的红细胞。另外Polybrene也多用于蛋白测序，

因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现

象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。

注：Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞）毒性较

大，初次应用建议先做毒性测试[1]。

基本属性：

别 名：1,5-dimethyl-1,5-diazaundecamethylene polymethobromide

CAS No.：28728-55-4

纯 度：≥94% (titration)

溶解方法：溶于水，溶解能力高达10%。0.9%Nacl溶液配制1mg/mL

的储存液，可以滤膜除菌或高压灭菌。

保存与稳定性：粉末2-8℃保存，避免潮湿。1mg/mL储存液2-8℃，

至少一年保持稳定。

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操作步骤（仅作参考）：

实验1：逆转录病毒感染（Retroviral Infection）

（1） 重组逆转录病毒原液的制备：取5ml生长培养基（5%血清）加

入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，

吸去培养液并用0.45μm滤器过滤。

（2）待感染细胞的培养：100mm培养盘内加入10ml完全培养基，

细胞密度为5×105/盘。

（3）病毒感染：细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene

的2ml病毒上清 （或将病毒原液稀释到2ml）感染细胞，polybrene

的终浓度为5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。

（4）收集病毒颗粒：加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5

的比例用选择培养基裂解细胞。

实验2：转染

（1）完全生长培养基培养细胞,培养细胞密度约50%；

（2）孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基- Polybrene混合液，按如

下操作制备混合液：①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm

培养皿3ml），37°C预热；②添加10ng~10µg质粒轻轻混匀；③加

入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需

要按顺序加入。

（3）去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°

C孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。

（4）去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution

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（15%DMSO in

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1X HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养

（5）立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细

胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿

每次用10ml培养液清洗。皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶

液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞

4min。

（6）加入完全培养基到细胞中；

（7）稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂

解细胞。

瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获

细胞。

使用浓度（详细步骤见文献）：

Polybrene的具体使用浓度依据细胞种类，转染方法等影响，以下使

用浓度仅作参考。

（1）为提高腺病毒转染效率和LacZ转基因表达，使用6μ

g/ml Polybrene处理病毒载体后转入BHK-21细胞（MOI为100），转

染率提高到95%，没有用Polybrene处理的只有2.3%转染率[2]。

（2）在KSHV(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus)纯化和转染

实验中，浓缩的病毒与8μg/ml Polybrene加到BCBL-1细胞中37℃

下孵育2h[3]。

（3) 在逆转录病毒构建研究中，用v-rasHa逆转录病毒转染角质细胞

（Keratinocytes）后在含有4μg/ml Polybrene培养基中培养3天，病

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毒滴度为1

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×107 virus/ml，MOI为1[4]。

（4) 在shRNA编码的慢病毒载体的转染研究中，病毒上清中加入8

μg/ml Polybrene，转染到HEK293细胞中[5]。

（5) 在慢病毒shRNA转染研究中，将含有6μg/ml Polybrene的新鲜

培养基加入到培养24h的RCC10细胞中，用慢病毒颗粒转染细胞[6]。

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